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分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性研究

发布:多吉利        来源:www.duojili.cn  

分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性研究

[摘要] 目的:研究分支杆菌医院感染株与消毒标准株对高效消毒剂戊二醛的抗性差异。方法:通过悬液定量杀灭试验观察戊二醛作用不同时间对两株不同来源的分支杆菌的杀灭效果。结果:2%中性强化戊二醛作用1 min,3 min,5min,分支杆菌医院感染株的杀灭率分别为94.73%,99.989%和99.9990%;消毒标准株的杀灭率分别为99.47%,99.997%和99、9999%。结论:分支杆菌医院感染株对2O7o中性强化戊二醛的抗力大于标准株。

[关键词] 分支杆菌;消毒标准株;医院感染株;戊二醛;抗性

近1O多年来,结核病在世界范围内急剧回升,全球有近20亿人口受到结核病感染,我国约有100万活动性结核病人,每年约20万人死于结核病。WHO已将结核病作为重点控制的传染病之一,并宣布全球结核病处于紧急状态,结核病重新成为全球关注的重要的公共卫生问题和社会问题。在这种严峻的形势下,国内外又相继出现了大量的分支杆菌引起医院内感染的报道。引起医院内感染增加的原因,除了生物因素、环境因素和营养因素外,医院消毒的不合理、不规范是一个重要因素。消毒剂的使用在杀灭细菌的同时,也诱导其产生对消毒剂的抗性,为了了解分支杆菌对消毒剂的抗性变化,我们将龟脓肿分支杆菌医院感染菌株与分支杆菌消毒标准株进行了抗性试验检测,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验菌悬液制备试验菌为龟分杆菌脓肿亚种标准株CMCC(B)93326,由军事医学科学院提供。龟脓肿分支杆菌医院感染株为1998年深圳市妇儿医院发生分支杆菌医院感染时病人脓肿分泌物的分离株。取5 6代分支杆菌培养基斜面新鲜培养物(72 h),用5.0 ml稀释液洗下菌苔,再移至1含有6—7 g玻璃珠的无菌锥形底容器中,电动混合器混合至少5 min,取该溶液2.0ml加入2.0ml有机干扰物质制成含菌量为1 X’ 5XlO7 cfu/ml的菌悬液,备用。

1.1.2 消毒剂浓度为2%的强化中性戊二醛,由深圳市楚亮生物工程开发有限公司生产。

1.1.3 中和剂 1.O%甘氨酸+O.2%卵磷脂+3.O%吐温80的PBS溶液。

1.1.4 稀释液0.1%胰蛋白胨的生理盐水溶液。

1.1.5 标准硬水(硬度342 mg/l)。

1.1.6 有机干扰物3%牛血清白蛋白液。

1.1.7 培养基分支杆菌干燥培养基(上海奥普生物医药有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 中和剂选择试验试验分为6组,分别为:①消毒剂+菌悬液;② (消毒剂+菌悬液) +中和剂;③ 中和剂+菌悬液;④ (消毒剂+中和剂)+菌悬液;⑤稀释液+菌悬液(正常菌对照);⑥稀释液+中和剂+培养基;试验结果:以第1组不长菌或仅有极少数试验菌菌落生长,第2组有较第1组多。但较第3、4、5组少的试验菌菌落生长,第3、4、5组组间菌数误差率≤15%,第6组不长菌,表明所用中和剂及其浓度适宜,中和剂及中和产物对试验菌和培养基无不良影响,

1.2.2 悬液定量杀菌试验取消毒试验用无菌大试管,加入1.0 ml含有机干扰物质的菌悬液,置20±1~C水浴中,5min后,用无菌吸管吸取2%强化中性戊二醛4.0 ml注入其中。迅速混匀并记时。待试验菌与消毒液相互作用至各预定时间,分别吸取O.5 ml试验菌与消毒剂混合液加入4.5ITl经灭菌的中和剂中,混匀。各试管试验菌与消毒剂混合液经加中和剂作用10 min后,分别吸取1.0 ml样液,按活菌培养计数方法测定存活菌数,每管样液接种2个平板。如平板上生长的菌落数较多时,可进行1O倍稀释后,再进行活菌计数。同时用稀释液代替消毒液,进行平行试验,作为阳性对照。接种后的所有试验样本均放入干净的塑料袋内,在37~C温箱中培养1周,观察最终结果。试验重复3次。

1.2.3 统计方法运用 检验进行灭杀率比较。

3 结果

3.1 中和剂选择试验结果试验表明,用含1.O% (g/m1)甘氨酸、O.2% (g/m1)卵磷脂和3.O% (ml/ml)吐温8O的PBS溶液中和浓度为2%的强化中性戊二醛,可符合所定要求。

3.2 悬液定量杀菌试验结果 2%强化中性戊二醛作用不同时间对悬液中的龟脓肿分支杆菌医院感染株和分支杆菌消毒标准株的杀灭率见表2,经作用1、3、5 min对两株菌的杀灭率差异有显著性( 值分别为122151.5、120.3、24.0,P均<O.O1)作用时间<5 min时龟脓肿分支杆菌医院感染株对2%强化中性戊二醛的抗力大于分支杆菌消毒标准株。2%强化中性戊二醛对两株分支杆菌作用10 min的杀灭率分别为99.9999%和100%,经两者差异无显著性( :0.945,P>O.05)。

4 讨论

消毒剂的广泛使用已有很长的历史,同细菌对抗生素的耐药性一样,细菌长时间接触同一种消毒剂会对该类消毒剂产生抵抗力,即所说的抗性。早在1952年,C.E.c~plin就发现细菌对消毒剂有一种类似于细菌耐药性的性质。随着社会的发展,消毒剂使用越来越广泛,细菌对消毒剂抗性的问题受到Et益广泛的关注,如。有医院供水系统中存在龟分支杆菌耐受消毒剂而污染气管镜引起感染的报道;1998年深圳市妇儿医院由于戊二醛使用不当造成了168例由龟脓肿分支杆菌引起的医院内感染,这些感染给病人和医院造成了巨大的损失。目前认为,消毒剂的滥用、处理方法不当及用量不足是细菌对消毒剂产生抗性的主要原因[ 。为了研究医院感染菌株对消毒剂的抗性变化,本文用2%强化中性戊二醛对龟脓肿分支杆菌医院感染株和分支杆菌消毒标准株进行了悬液定量杀菌试验,结果发现,2%强化中性戊二醛作用1 min,3 min,5 min,医院感染株的杀灭率分别为94.73%,99.9895%和99.9990%;消毒标准株的杀灭率分别为99.47%,99.997%和99.9999%。在达到灭菌水平以前,医院感染株对2%强化中性戊二醛的抗力大于标准株。该研究结果为从基因水平研究其抗性产生的机制奠定了基础。

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