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消毒剂中污染菌对消毒剂抗性及耐药性研究

发布:多吉利        来源:www.duojili.cn  

消毒剂中污染菌对消毒剂抗性及耐药性研究

[摘要] 目的:了解社区医疗消毒剂中污染菌抗消毒剂性和耐药性情况。方法:对来自使用中消毒剂的9株芽胞杆菌进行细菌定量杀灭试验,同期对45株污染菌进行药敏试验。结果:在以ATCC9372为参考菌的最低杀菌浓度和杀菌时间下,对9株污染菌进行细菌定量杀灭试验的杀菌效果均未达到消毒学要求;45株试验污染菌对CRO等8种抗生素敏感性显著下降,且出现二重、多重,甚至六重耐药。结论:试验污染菌对消毒剂抗性增强,试验污染菌耐药谱中CRO—M—P耐药谱型比例最大。

[关键词] 使用中消毒剂;污染菌;细菌定量杀灭试验;耐药谱;抗性

消毒剂在预防疾病尤其在杀灭病原微生物方面起着重大作用,由于消毒剂和抗生素的广泛使用以及微生物遗传物质本身的特性及其变异性,导致细菌对特定的消毒剂和其他化学疗剂产生了越来越强的抵抗性。了解使用中消毒剂污染菌的抗消毒剂特性及抗化学疗剂性就显得尤为重要。以下就来自社区医疗使用中消毒剂的污染菌进行细菌定量杀灭试验及药敏试验。

1 材料与方法

1.1 菌株

标准菌株金黄色葡萄球菌(ATCC6538),枯草芽胞杆菌黑色变种(ATCC9372),大肠杆菌(8099),多粘芽胞杆菌(63512— 1),蜡样芽胞杆菌,地衣芽胞杆菌(63519—2),嗜热芽胞杆菌,购自北京生物制品鉴定所。样本菌分离自社区医疗使用中消毒剂,主要为芽胞杆菌、微小球菌、葡萄球菌。用于细菌定量杀菌试验的9株芽胞杆菌和药敏试验的31株芽胞杆菌、14株球菌分别属于多粘芽胞杆菌,蜡样芽胞杆菌,地衣芽胞杆菌,嗜热芽胞杆菌,侧胞芽胞杆菌,变异微球菌,藤黄微球菌(28001—24),表皮微球菌,玫瑰色微球菌,共十个菌种。

1.2 试验消毒剂

2%戊二醛,由江门市恒健药业有限公司生产。考虑到9株芽胞菌大多来自戊二醛,且碱性戊二醛消毒效果较好。经测定其pH=8.2,按《消毒技术规范》滴定浓度为1.92%。

1.3 中和剂

经中和剂鉴定试验,确定中和剂为:1.5%甘氨酸+0.96%吐温+0.96%卵磷脂pH7.2PBS液。

1.4 培养基

细菌定量杀灭试验为普通营养琼脂培养基。药敏试验增菌用胰酶解酪蛋白大豆肉汤,药敏试验培养基用M—H培养基。

1.5 方法

1.5.1 细菌定量杀灭试验芽胞样本菌以枯草芽胞杆菌黑色变种(ATCC9372)为参考菌,按《消毒技术规范》(2002年版)第二部分消毒产品检验技术规范进行消毒剂杀灭微生物试验,筛选中和剂,进行细菌定量杀灭试验,计算杀灭率。

1.5.2 药敏试验采用WHO推荐的K—B法,质控菌株为大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923,药敏试验抗生素药片有头孢三嗪(CRO 30 ug)、氨苄青霉素(AM 10 U)、青霉素G(P 10 U)、阿米卡星(ANK 30 ug)、红霉素(E l5ug)、庆大霉素(GM 30 ug)、去甲万古霉素(NVA 30 ug)、强力霉素(DO 30 ug),均购自北京天坛药物生物技术开发公司。试验细则及结果判断参照美国NCCLS标准进行。

2 结果

2.1 细菌定量杀灭试验

0.96%戊二醛作用6 h标准菌株ATCC9372达到消毒学要求时,9株试验污染菌都没有达到消毒学要求;O.96%戊二醛作用8 h有l7、24③ 、l9、36① 、49五株试验污染菌的杀灭率比ATCC9372低,且l7、24③ 、l9未达到消毒学要求;1.92%戊二醛作用4 h 17、19、24③ 达消毒学要求,但杀灭率比ATCC9372低。

2.2 药敏试验结果

2.2.1 本实验中7株标准菌株对8种抗生素均敏感。从使用中消毒剂分离出的3l株芽胞杆菌和l4株球菌中,有l3株芽胞杆菌和7株球菌对所选部分抗生素敏感,余下的l8株芽胞杆菌和7株球菌对8种抗生素耐药。3l株芽胞杆菌与l4株球菌对8种抗生素的耐药性分布可知,耐药芽胞杆菌对GM均敏感,耐药球菌对AN、DO也都敏感。试验污染菌对抗生素耐药性总体分布:对CRO、AM、P的耐药性强于对其它抗生素的耐药性,对三者的耐药率分别为37.78% 、42.23% 、40.00% ,其中芽胞杆菌对AM、P耐药性为最强,均达48.39% 。除E、GM、NVA三种抗生素外,芽胞杆菌对其它抗生素的耐药率均高于球菌。

耐药性总体分布为杆菌耐药性比球菌耐药性强。使用中消毒剂分离出的污染菌的耐药谱型主要由CRO、AM、P组成,其中尤以CRO—AM —P谱型污染菌所占比重最大,达44.0o%。耐药谱以多重(包括三重)为主,杆菌累计耐药率达77.80% ,球菌累计耐药率为28.58% 。

2、3 细菌定量杀灭试验结果及药敏试验结果比较特别比较消毒剂抗性较强的9株试验污染菌消毒剂抗性与耐药性间的关系,比较结果可知消毒剂抗性相对较强的4株菌均耐药,且集中在抗CRO、AM、P三种抗生素。

3 讨论

对芽胞杆菌细菌定量杀灭试验采用ATCC9372作为参考菌,有报道用枯草芽胞杆菌作为过氧化氢杀芽胞的指示菌 。目前,国内在微生物对消毒剂抗性判断方面未有标准,国外也多是采用MIC/MBC来检测,其操作简单,但判断困难,不能精确、全面反映微生物的抗消毒剂水平。本试验用ATCC9372为标准参考菌株,应用其对消毒剂具有较强抵抗力,采用细菌定量杀灭试验,以两者杀灭率高低来衡量试验菌对消毒剂的抗性水平。

试验结果表明1.92%戊二醛作用4 h比0.96%戊二醛作用8 h消毒效果好。表1中0.96%戊二醛作用6h结果表明试验污染菌比ATCC9372具有更强的抗消毒剂特性,而0.96%戊二醛作用8 h结果则却有5株试验菌抗消毒剂特性比ATCC9372强,这说明微生物对消毒剂的抗性与消毒剂的浓度、作用时间有关。目前,普遍认为微生物对消毒剂的抗性由微生物的生理结构和遗传学特征决定,但其产生机制仍不是很清楚 ],可能与细菌对消毒剂的固有抗性和获得性抗性有关。多数人认为消毒剂的滥用、处理方法不当和用量不足是消毒剂抗性产生的主要原因 。因此,在使用消毒剂时,应科学、合理、有效使用,以减少消毒剂抗性菌株的产生,在使用过程中,应定期监测其有效浓度及其污染情况,以控制院内感染发生。

药敏试验结果表明,试验污染菌耐药率以CRO、AM、P为最高,而CRO—AM—P三重耐药从另一个侧面说明细菌耐CRO、AM、P具有普遍性,这与有关报道相符 。CRO、AM、P正是临床应用最为广泛抗菌素,这也说明抗生素的反复接触易使细菌产生对抗生素的抗性。所以治疗与预防疾病时需合理使用抗生素,以最大限度地发挥药物的治疗作用。

本次试验结果表明,来自不同消毒剂的污染菌耐药性无明显差异,这或许可说明不同消毒剂对污染菌抗消毒剂特性形成无差别。至于污染菌的消毒剂抗性与耐药性之间是否有相关性仍需进一步试验证明。

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